Ключевые методы лабораторной диагностики распространенных инфекций

Питательные среды для аэробов и анаэробов. Требования, предъявляемые к питательным сре­дам, классификация.

Требования:

среды должны быть питательными

должны иметь определенные ph

должны быть изотоническими, т.е.
осмотическое давление в среде должго
быть такое же как в клетке.

должны быть влажными и не слишком
жидкими

должны облпдпть определенным
окислительно-восстановительным
потенциалом

должны быть стерильными

должны быть унифицированными, т.е.
содержать постоянные количества
отдельных ингредиентов.

Питательные среды можно разделить:

А) По происхождению:

1} естественные — натуральные продукты
питания (мясо, молоко, картофель);

2) искусственные — приготовленные
специально для выращивания микробов:
— среды из естественных продуктов (мясная
вода, мясопептонный бульон (МПБ),
мясопептонный агар (МПА), — не имеющие
постоянного состава; — синтетические
питательные среды — растворы строго
определенных количеств солей, аминокислот,
азотистых оснований, витаминов в
дистиллированной воде — имеют постоянный
состав, используются для выращивания
микроорганизмов и культур клеток при
получении вакцин, иммунных сывороток
и антибиотиков;

Б) По назначению:

1) общего назначения (МПБ, МПА) — на них
растет большинство микробов;

2) элективные — избирательно способствуют
росту одного вида микробов из смеси
(например, желточно-солевой агар для
стафилококков);

3) дифференциально-диагностические —
позволяют отдифференцировать по внешнему
виду среды один вид микроба от других
(например среды Эндо, Левина для кишечной
группы микробов).

Кроме того, в зависимости от целей
использования
в схеме выделения
чистых культур, по назначению можно
выделить следующие среды:

1) обогащения — подавляют рост микробов,
сопутствующих возбудителю;

2) для получения изолированных колоний;

3) накопления чистой культуры;

В) По консистенции:

1) жидкие;

2) полужидкие (при добавлении агар-агара
в концентрации 0,5-0,7%);

3) плотные — выше 1%.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования – это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь питательной среды, и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки

Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей

Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Брюшной
тиф и паратифыА
и В—
острые кишечные инфек­ции,
характеризующиеся поражением
лимфатического аппарата ки­шечника,
выраженной интоксикацией. Их возбудителями
явля­ются соответственно Salmonellatyphi,
Salmonellaparatyphi
А и
Salmonellaschottmuelleri.

Таксономическое
положение.
Возбудители брюшного тифа и паратифов
А
и
В
относятся
к отделу Gracilicutes,
семей­ству
Enterobacteriaceae,
роду
Salmonella.

Морфологические
и тинкториальные свойства.
Сальмонеллы — мелкие грамотрицательные
палочки с закругленными конца­ми. В
мазках располагаются беспорядочно. Не
образуют спор, имеют микрокапсулу,
перитрихи.

Культуральные
свойства.
Сальмонеллы — факульта­тивные
анаэробы. Оптимальными для роста являются
темпера­тура 37С. Растут на простых
питательных средах. Элективной средой
для сальмонелл является желчный бульон.

Биохимическая
активностьсальмонелл
достаточно высока, но они не сбраживают
лактозу. S.typhiменее
активна, чем возбудители паратифов.

Антигенные
свойства и классификация.
Сальмо­неллы имеют О—
и
H-антигены,
состоящие из ряда фракций. Каждый вид
обладает определенным набором антигенов.
Все виды сальмонелл, имеющие общую так
назы­ваемую групповую фракцию
0-антигена, объединены в одну группу.
Таких групп в настоящее время насчитывается
около 65. S.typhiи
некоторые другие сальмонеллы имеют
Vi—антиген
(раз­новидность К-антигена), с этим
антигеном связывают вирулен­тность
бактерий, их устойчивость к фагоцитозу.

Факторы патогенности.
Сальмонеллы образуют эндо­токсин,
обладающий энтеротропным, нейротропным
и пирогенным действием. С белками
наружной мембраны связаны адгезивные
свойства, наличие микрокапсулы
обусловливает устойчивость к фагоцитозу.

Резистентность.
Сальмонеллы довольно устойчивы к низ­кой
т-ре. Очень чувствительны к дезинфицирующим
веществам, высокой температуре,
ультрафиолетовым лучам. В пищевых
продуктах (мясе, молоке) сальмонеллы
могут не только долго сохраняться, но
и размножаться.

Эпидемиология.
Брюшной тиф и паратиф А
—
антропонозные инфекции; источником
заболевания являются больные люди и
бактерионосители. Источником паратифа
В
могут
быть также сельскохозяйственные
животные. Механизм заражения
фекально-оральный. Среди путей передачи
преобладает водный.

Патогенез.
Возбудители попадают в организм через
рот, достигают тонкой кишки, где в ее
лимфатических образованиях размножаются
и затем попадают в кровь (стадия
бактериемии). С током крови они разносятся
по всему организму, внедряясь в
паренхиматозные органы (селезенку,
печень, почки, костный мозг). При гибели
бактерий освобождается эндотоксин,
вызывающий интоксикацию. Из желчного
пузыря, где С. могут длительно сохраняться,
они вновь попадают в те же лимфатические
образования тонкой кишки. В результате
повторного поступления С. может развиться
аллергическая реак­ция, проявляющаяся
в виде воспаления, а затем некроза
лим­фатических образований. Сальмонеллы
выводятся из организма с мочой и калом.

Клиника.
Клинически брюшной тиф и паратифы
неразли­чимы. Инкубационный период
составляет 12 дней. Болезнь начинается
остро: с повышения температуры тела,
по­явления слабости, утомляемости;
нарушаются сон и аппетит. Для брюшного
тифа характерны помутнение сознания,
бред, галлюцинации, сыпь. Очень тяжелыми
осложнениями являются прободение стенки
кишки, перитонит, кишечное кровотечение,
возникающие в результате некроза
лимфатических образований тонкой кишки.

Иммунитет.
После перенесенной болезни иммунитет
проч­ный и продолжительный.

Микробиологическая
диагностика.Основной
метод диа­гностики — бактериологический:
посев
и выделение S.
typhi
из крови (гемокультура), фекалий
(копрокультура), мочи (урино-культура),
желчи, костного мозга. РИФ для обнаружения
антиге­на возбудителя в биологических
жидкостях. Серологический
ме­тод обнаружения
0- и Н- антител в РПГА. Бактерионосителей
выявляют по обнаружению Vi-антител
в сыворотке крови с по­мощью РПГА и
положительному результату
бактериологического; выделения
возбудителя. Для внутривидовой
идентификации применяют фаготипирование.

Лечение.
Антибиотики. Иммуноантибиотикотерапия.

Профилактика.
Санитарно-гигиенические мероприятия.
Вакци­нация — брюшнотифозная химическая
и брюшно-тифозная спиртовая вакцина,
обогащенная Vi-антигеном.
Для экстренной профилактики —
брюшнотифозный бакте­риофаг.

Ход исследования

Исследовать культуру можно как в первозданном, так и в окрашенном виде. В последнем случае как колонии микроорганизмов, так и одиночные бактерии будут мертвы, что позволяет лучше ознакомиться со строением этих простейших организмов. При исследовании препарата в его первозданном виде, в свою очередь, лаборант получает больше информации об активности микробов. В обоих случаях препарат рассматривается при помощи микроскопа.

Окрашивание среды проводится в два этапа, сначала препарат подготавливают к процедуре и только затем его окрашивают. Подготовка образца проходит следующим образом:

1. Образец, предназначенный для исследования, равномерно распределяется по приборному стеклу в форме круга или овала. При наличии в материале посторонних примесей (к примеру, гноя) перед добавлением исследуемого образца на стекло наносится 1-2 капли воды.
2. После этого получившийся мазок следует высушить.
3. Как только мазок высохнет, его необходимо зафиксировать с помощью пламени из горелки.

По окончании данной процедуры проводится окрашивание образца.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

• раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
• висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

• микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
• биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
• серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
• биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

Санитарная микробиология. Предмет изучения, цели и задачи.

Предмет
изучения—
санитарно- микробиологическое состояние
объектов окружающей среды и пищевых
продуктов, разработка санитарно-микробиологических
нормативов и методов индикации патогенных
микроорганизмов в различных объектах
окружающей среды.

Задачи:

-микробиологическое
исследование объектов окружающей среды

-оценка
микробиологического состояния объектов
окружающей среды

-разработка
ГОСТов и методических указаний,
определяющих соответствие микрофлоры
объектов окружающей среды гигиеническим
требованиям

-разработка
рекомендаций и мероприятий по оздоровлению
объектов окружающей среды и контроль
за их выполнением

3.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды

3.1.1. Исследования бактериальной обсемененности
воздушной среды проводят в помещениях лечебных организаций в зависимости от их
функционального назначения на санитарно-микробиологические показатели:

общее количество микроорганизмов в 1 м3
воздуха (КОЕ/м3);

количество колоний S.
aureus в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3);

количество плесневых и дрожжевых грибов в
1 м3 воздуха.

3.1.2. Пробы воздуха отбирают
аспирационным методом с помощью аппаратов и устройств, разрешенных к применению
в установленном порядке.

Количество пропущенного воздуха должно
составлять 100 дм3 для определения общего количества
микроорганизмов, дрожжевых и плесневых грибов и 250 дм3 для
определения S. aureus. Исследование воздуха седиментационным методом не
допускается.

3.1.3. Для определения общего количества
микроорганизмов в 1 м3 воздуха забор проб проводят на питательный
агар типа МПА, СПА, ГРМ-агар и другие, приготовленные согласно инструкций по
применению. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение (48 ± 2) ч,
подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м3
воздуха. При наличии роста колоний дрожжевых и плесневых грибов, их
подсчитывают и делают пересчет на 1 м3 воздуха. В протоколе
количество дрожжевых и плесневых грибов указывают отдельно.

Примечание: При переносе аппаратов и
устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность
обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки,
крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают спиртом
(70 %).

1. Первый день.

Для определения наличия S.
aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на
основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда №
10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в
термостате при 37 °С (48 ± 2) ч.

2. Второй-третий день.

На вышеуказанных средах стафилококк
растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных
колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают
положительную лецитовителлазную реакцию в 60 — 70 % случаев. Отвивка на
скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных
на стафилококк. Для исследования отвивают прежде всего колонии, дающие положительную
лецитовителлазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на
чашках таких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные
колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на
чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не
менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при
37 °С на (24 ± 2) ч.

3. Четвертый день.

После инкубации у выделенных штаммов
проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие
плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).

Окраску по Граму проводят общепринятым
методом. Под микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид
фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими кучками
(«кружево»).

Если культура обладает только
плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для
окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие
определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита, гемолитическая активность).

При необходимости, после выделения чистой
культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам,
дезинфицирующим средствам, бактериофагам.

4. Пятый день.

Учет результатов дополнительных тестов.
Окончательная выдача ответа.

Для чего необходимо бактериологическое исследование?

Бактериологические исследования позволяют идентифицировать возбудителя болезни и установить его степень чувствительности к определенным антибиотикам для выявления эффективности лечения. Данный метод исследования широко применяется в медицинской практике инфекционистами, отоларингологами, гинекологами, урологами, онкологами, хирургами и другими специалистами. Он назначается при любых воспалительных заболеваниях в организме и при подозрении на развитие сепсиса.

Как правильно осуществить забор материала?

Материалом для бактериологических исследований может служить кровь, ликвор, мокрота, испражнения, моча, желчь, спинномозговая жидкость, грудное молоко, выделения из ротовой полости, половых органов, зева, носоглотки и ран.

Главное требование забора – стерильность посуды и инструментов. При несоблюдении этого требования результаты окажутся совершенно неправильными, так как произойдет обсеменение собранного материала.
Брать биологический материал для исследований следует до начала приема антибиотиков. В противном случае результат существенно исказится.
Полученный материал необходимо немедленно доставить в лабораторию, чтобы не допустить его гибели.
В нашей лаборатории забор биологических жидкостей выполняется в абсолютно стерильных условиях специально обученными медсестрами в соответствии со всеми правилами, что гарантирует качество собранного материала и достоверность полученных результатов.

Как проходит исследование?

Бактериологические исследования включают несколько этапов, на проведение которых требуется от 3 до 10 дней.
Чтобы выделить чистую культуру возбудителя, осуществляют посев полученного материала на специальную питательную среду, на которой способен жить только определенный вид микроорганизмов. Например, для идентификации дифтерийной палочки применяют теллуритовую среду, а для обнаружения кишечной палочки – среду Эндо. Если требуется выделить условно-патогенные микроорганизмы, то пользуются универсальными питательными средами, чаще всего кровяным агаром.

Питательную среду помещают в термостат, чтобы создать оптимальные условия для роста и размножения микроорганизмов.
По истечении определенного времени производят контрольный осмотр полученных колоний

Если необходимо, используют специальные красители, позволяющие обнаружить определенные штаммы бактерий. 
При контрольном осмотре обращают внимание на цвет, форму и плотность колонии, ее способность к разложению некоторых органических и неорганических соединений. Затем с помощью специальных методов подсчитывают количество микроорганизмов в образце.

Плюсы и минусы бактериологического исследования

Бактериологический посев имеет несколько преимуществ:

• характеризуется высокой специфичностью;
• позволяет проводить исследование любой биологической жидкости;
• дает возможность определить чувствительность патогенного микроорганизма к определенному лекарству и правильно подобрать терапию.

Но есть у этого метода и некоторые недостатки:

• результат можно получить только по происшествии нескольких дней;
• требует высокой квалификации персонала бактериологической лаборатории;
• предъявляет высокие требования к забору материала.  

Результат исследования

Результатом бактериологического исследования является обнаружение возбудителя (или его отсутствие) в собранном материале и выявление его концентрации, что позволяет подобрать результативную терапию и эффективно избавиться от возбудителей.

§ 3. Основы эпидемического процесса

Эпидемический процесс — это
возникновение и распространение инфекций
среди населения. Для возникновения и
непрерывного течения эпидемического
процесса необходимо взаимодействие
трех факторов: источника возбудителей
инфекции, механизма передачи инфекции
и восприимчивого населения. Выключение
любого из этих звеньев приводит к
прерыванию эпидемического процесса.
Биологической основой эпидемического
процесса служит паразитарная система,
т. е. взаимодействие паразита и хозяина.

Возбудители инфекционных болезней
делятся по характеристике источников:

АНТРОПОНОЗЫ

ЗООНОЗЫ

Под механизмом передачи
подразумевают способ перемещения
возбудителя инфекционных заболеваний
из зараженного организма в восприимчивый.

Этот механизм включает смену
трех фаз:

выведение микроорганизма из организма
хозяина в окружающую среду;

нахождение возбудителя в окружающей
среде и

внедрение возбудителя в восприимчивый
организм.

Механизмы передачи подразделяются
на:

фекально-оральный,

аэрогенный (воздушно-капельный),

кровяной (трансмиссивный),

контактный,

вертикальный (от матери плоду через
плаценту).

По механизму передачи и была предложена
Л.В. Громашевским классификация
инфекционных болезней (см. выше).

Следующим элементом эпидемического
процесса является восприимчивость
населения.

Если иммунная «прослойка»
населения высокая, то можно считать,
что достигается состояние эпидемического
благополучия и циркуляция возбудителя
прекращается. И наоборот, при снижении
иммунной прослойки населения увеличиваются
те или иные инфекционные заболевания.
Так, например, в 90-е гг. в России снизилась
иммунная «прослойка» населения к
дифтерии, что привело к резкому увеличению
дифтерийных больных. Поэтому задачей
эпидемиологов является создание в
коллективах этой «прослойки» путем
проведения массовой вакцинации против
соответствующих возбудителей. В последние
годы широко применяется противогриппозная
вакцинация, что в общем привело к снижению
заболеваемости гриппом. Интенсивность
эпидемического процесса выражается в
показателях заболеваемости и смертности
на 10 тыс. или 100 тыс. населения.

Эпидемиологи различают три
степени интенсивности эпидемического
процесса:

Спорадическая заболеваемость — это
обычный уровень заболеваемости данной
нозологической единицы на одной
территории в данный момент времени.

Эпидемия— распространение инфекционных
болезней среди населения села, города
или области.

Пандемия — распространение инфекционных
заболеваний среди населения разных
стран и континентов. Например, пандемия
чумы в прошлом столетии или распространение
ВИЧ-инфекции в XX в.

В соответствии с распространенностью
С.В. Прозоровский разделил инфекционные
заболевания на:

1) кризисные инфекции — инфекции,
угрожающие существованию человеческой
популяции (ВИЧ-инфекция);

2) массовые — вызывающие свыше 100
заболеваний на 100 000 населения. Первое
место здесь занимают грипп и ОРВИ, на
долю которых приходится ежегодно 92,5%
всех случаев инфекционной заболеваемости;

3) распространенные управляемые — от
20 до 100 случаев заболевания на 100 тыс.
населения. К таким заболеваниям относятся
те инфекции, против которых осуществляется
вакцинация населения — это дифтерия,
столбняк, бруцеллез, коклюш. Хотя,
несмотря на наличие профилактических
препаратов, нельзя сказать, что все
обстоит благополучно. Так, среди привитых
против дифтерии заболевание составляет
57%;

4) распространенные неуправляемые —
заболеваемость менее 20 случаев на 100
тыс. населения. Это группа инфекций,
требующих постоянного внимания в плане
научных исследований. Это относится к
менингококковой инфекции, лептоспирозам,
цитомегаловирусной инфекции и др.;

5) спорадические — единичные случаи
заболеваемости на 100 тыс. населения
(бешенство, сыпной тиф).

Расшифровка бакпосева

Результат анализа оценивается по нескольким показателям, учитывающим не только качественный фактор (подтверждение наличия бактерий-возбудителей в среде), но и количественный — то есть, степень концентрации патогенных микроорганизмов в исследуемом материале. Для подсчета количества микробных клеток используется понятие колониеобразующей единицы (КОЕ), по которому можно определить уровень насыщенности бактериями изучаемого образца.

Выделяют 4 степени роста возбудителей:

• Первая — скудный рост бактерий на жидкой питательной среде и отсутствие роста на твердой среде. Такой результат не считается отклонением от нормы.
• Вторая — рост бактерий на твердой среде до 10 колоний. Свидетельствует не о наличии болезни, а скорее о загрязненности лабораторных принадлежностей для исследования.
• Третья — рост бактерий на твердой среде в пределах 10-100 колоний.
• Четвертая — более 100 колоний.

В заключении, выдаваемом на руки пациенту, результаты бакпосева обозначаются следующим образом:

• указывается название выявленного возбудителя на латинском языке (например, Trichomonas vaginalis — трихомонада);
• прописывается концентрация микроорганизма, выращенного в условиях питательной среды (норма — до 103 КОЕ/мл, ненорма — от 105 КОЕ/мл);
• указывается характер среды: флора условно-патогенна, патогенная.

Одновременно с определением концентрации бактерий производится анализ их чувствительности к антибиотикам. Наличие положительной реакции на тот или иной антибактериальный препарат обозначается символом «S», отрицательной — «R».

Общие сведения о бактериологических исследованиях

Для того изначально изолируют отдельные типы микробов и выращивают их в виде отдельных культур, идентифицируют или устанавливают соответствие выделенных микроорганизмов видам, которые описаны в специализированных фундаментальных определителях.

В результате организации бактериологических исследований образуются колонии микроорганизмов.

Определение 2

Колонии – это популяции микробов клеток одного вида, которые сформировались путем деления одной микробной клетки при культивировании на питательной среде достаточной плотности при оптимальной температуре.

Также бактериологические исследования необходимы для получения чистой культуры клеток.

Определение 3

Чистая культура клеток – это клеточная масса, состоящая из микроорганизмов, которые принадлежат одному и тому же виду и получаются в качестве потомства одной клетки.

Бактериологические исследования основываются на установлении морфологии колоний и особенностей роста культуры на питательных средах, а также при учете того факта, что биохимические свойства бактерий присущи определенному виду, роду варианту данного типа микроорганизмов.

Среди методов бактериологических исследований можно выделить разнообразные варианты, но эволюция данного типа получения знаний прослеживается по принципу «от простого к сложному».

6.10.1. Санитарно-показательные микроорганизмы

Санитарно-показательные
микроорганизмы (СПМ)
– это представители нормальной
микрофлоры, которые выделяются
естественным путем в окружающую среду
и там сохраняются, поэтому служат
показателями санитарного неблагополучия,
потенциальной опасности исследуемых
объектов. Так, если на объектах обнаруживают
нормальных обитателей кишечника, делают
заключение о наличии фекального
загрязнения и возможном присутствии
патогенных энтеробактерий. Так как
патогенных представителей меньше и
выделить их труднее, то вначале выявляют
санитарно-показательные микроорганизмы
в окружающей среде, а после их выявления
можно проводить поиск патогенных.

СПМ условно
разделяют на 3 группы:

1.Группа
А включает
обитателей кишечника человека и животных,
эти микроорганизмы расценивают как
индикаторы фекального загрязнения. В
нее входят бактерии группы кишечной
палочки (БГКП) – эшерихии, энтерококки,
протеи, сульфитвосстанавливающие
клостридии (С.
perfringens),
термофилы, бактериофаги, ацинетобактер,
аэромонады.

2.Группа
В включает
обитателей верхних дыхательных путей
и носоглотки. В нее входят a-
и b-гемолитические
стрептококки, стафилококки
(плазмокоагулирующие, лецитиназоположительные,
гемолитические и антибиотикоустойчивые).

3.Группа
С включает
сапрофитические микроорганизмы,
обитающие во внешней среде, их расценивают
как индикаторы процессов самоочищения.
В нее входят бактерии-аммонификаторы,
бактерии-нитрификаторы, некоторые
спорообразующие бактерии, грибы,
актиномицеты, целлюлозобактерии,
сине-зеленые водоросли.

Санитарно-показательные
микробы должны отвечать следующим
требованиям:
они должны постоянно содержаться в
выделениях человека и теплокровных
животных и поступать в окружающую среду
в больших количествах; не должны иметь
другого природного резервуара, кроме
организма человека и животных; после
выделения их в окружающую среду, должны
сохранять жизнеспособность в течение
сроков, близких к срокам выживания
патогенных микробов, выводимых из
организма теми же путями; СПМ не должны
размножаться в окружающей среде; не
должны изменять свои биологические
свойства в окружающей среде; должны
быть типичными, чтобы их диагностика,
индикация и идентификация осуществлялась
без особого труда.

Санитарно-показательные
бактерии окружающей среды.

1.Вода
– бактерии группы кишечной палочки
(БГКП), энтерококки, стафилококки.

2.Почва
– БГКП, энтерококки, термофилы, возбудители
газовой гангрены.

3.Воздух
– бета-гемолитические стрептококки,
стафилококки.

4.Пищевые
продукты – БГКП, энтерококки, стафилококки,
протей.

5.Предметы
обихода – БГКП, фекальные стрептококки,
стафилококки.

Забор и транспортировка

Для проведения исследования требуется правильно подготовить воду. Ее забор делается по схеме:

1. Берется только стерильная бутылка.
2. Водопроводный кран, откуда будет делаться забор воды, предварительно обжигается.
3. Из крана на протяжении 7-10 минут должна сливаться вода. Только после этого ее можно набирать в стерильную емкость.
4. Тара наполовину набирается водой, закрывается пробкой и перевозится в лабораторию. При этом вода при доставке к месту анализа не должна контактировать со стерильной пробкой.

Для исследования подходит только та вода, с момента забора которой прошло не больше 1,5 часа.

Сам анализ проводится по следующему плану:

1. Осуществляют подготовку лабораторной посуды и всех материалов. Вся посуда стерилизуется, промывается и тщательно сушится. Стерилизация происходит в сушильном шкафу. Температура внутри него должна быть порядка 160-165С. Посуда обрабатывается сухим жаром на протяжении часа. Вместо сушильного шкафа может применяться автоклав. В нем температура ниже – порядка 126С. Обработка длится полчаса.
2. Простерилизованную посуду вынимают из шкафа только после того, когда он остынет до температурных значений меньше 60С.
3. Обработанную посуду помещают в лабораторные шкафы. Они должны плотно закрываться.
4. Готовят стерильную воду. Сначала исследуемая вода разливается по флаконам, которые закрываются пробками. После этого флаконы с водой стерилизуются в автоклаве в течение 20 минут при температуре 120С. Такая вода пригодна для использования в течение 2 недель.
5. Готовят питательную среду. Ее компонентами может быть как мясной бульон, так и глюкоза, лактоза или фильтрованная желчь скота.
6. Готовят химические реактивы для конкретного анализа.
7. Подготовленную питательную среду ставят на водяную баню, после чего охлаждают до 45-50С.
8. Расставляют стерильные чаши с пометками.
9. Берут несколько проб питательной среды и делают два посева в стерильные чаши.
10. Колбы со взятой для анализа воды открывают, обжигают их горлышки и немного продувают их воздухом через пипетку. Она должна быть стерильной.
11. Чистой палочкой делается забор воды. Она добавляется в стерильные чаши, которые закрываются пробкой.
12. Взятая вода заливается остуженным питательным раствором. Чаша со смесью быстро перемешивается вращательными движениями. Далее чаша ставится на ровную поверхность. Смесь внутри нее должна застыть.
13. Чаша с застывшим раствором переворачивается вверх дном и ставится в термостат. Там создается оптимальная среда для выращивания посевов (37С). Чаша находится в термостате сутки.
14. Чаша с выращенными колониями микроорганизмов кладется на затемненный фон вверх дном. При помощи лупы делается подсчет количества появившихся колоний бактерий. При подсчетах учитывается число микроорганизмов на 1 см3 взятой для анализа воды.
15. Результаты фиксируются в протоколе и регистрационном журнале. Дополнительно фиксируются особые условия, при которых проходил анализ.