Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности

МЕЛАНОМА. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ

I. Для диагностики первичной меланомы может быть использован тест FISH, но только в том случае, когда ни гистология, ни иммуногистохимия не дают результата (в очень редких случаях, клетки меланомы не реагируют на «покраски» ИГХ). Но если этим тестом заменяют иммуногистохимию, как тут: FISH и меланома , то вы должны четко понимать, что с вас либо просто «сосут деньги», либо кто-то пишет очередную диссертацию.

II. И «до кучи». Тест FOUNDATIONONE при меланоме и еще какие-нибудь подобные.Если врач предлагает вам пройти такое исследование, то он должен вам четко объяснить, чего вы получите «на выходе» (ну, кроме определения BRAF мутации). Какие лекарства, помимо уже известных и зарегистрированных, вам могут предложить по результатам этого теста ? В какие КОНКРЕТНО КИ вас включит врач, если в результате теста будет обнаружено «нечто неизведанное»?Вот статья, в самом начале которой четко написано, для чего предназначен этот тест. Перевод гуглом очень качественный. Я еще могу понять, когда его проводят в США, где доступность клинических исследований очень высока, но зачем его делать у нас, остается загадкой.

Добавочка, январь 2020г

Беларуссия, наши дни. Уж не знаю как там выполняется биопсия сторожевых лимфоузлов, но ситуация с ИГХ совершенно аналогична.

РОНЦ Блохина, Москва.

Что такое иммуногистохимия?

Иммуногистохимия

Раковые клетки производят определенные белки, у которых есть связь с антителами. ИГХ позволяет изучить взаимодействие между ними. Во время исследования используются стандартные антитела. Учитывая определенные изменения при взаимодействии клеток, медики определяют структуру и форму злокачественного новообразования.

Опухоль для человеческого организма является чужеродной. Во время борьбы с ней в теле пациента вырабатываются антитела. Иммуногистохимия помогает обнаружить раковые клетки, определяет их структуру и строение.

Для врачей подобное исследование важно тем, что по результатам они подбирают максимально эффективное лечение пациентам. При помощи ИГХ можно определить:

• развитие опухолей;
• рецепторы стероидных гормонов;
• образование злокачественной опухоли, если первичные признаки очага отсутствуют;
• формирование новообразования без классификации;
• количество мембранного белка (HER2) в клетках молочной железы.

Результатами исследования занимается специалист онколог

Важно определить количество гормональных рецепторов в молочных железах. Чем больше показатели, тем опухоль спокойнее и медленнее растет

У пациента высокие шансы, чтобы полностью избавиться от рака на ранней стадии развития.

Гормональная терапия в таких ситуациях позволяет добиться положительного исхода на 80%.

Проведение исследования

Проводится трепанобиопсия путем забора кусочка ткани из места предполагаемой опухоли. На груди у женщины маркером отмечается черная точка. Если была проведена операция, то иссеченный материал также подходит для изучения. Затем ткань проходит следующие этапы:

• отправляется в лабораторию;
• помещается в емкость с формалином;
• обезжиривается;
• заливается жидким парафином для получения блоков с целью изучения на гистологию;
• с блоков делаются срезы толщиной в 1 мм, помещаются на специальные стекла;
• срезы окрашивают препаратами или антителами для иммуногистохимии;
• через 10-12 дней лаборанты интерпретируют результаты.

Исход благоприятен после терапии гормональными препаратами, если Ki-67 в анализе, как показатель на онкогенность, не превышает 15-17%. Если доходит до 35% в составе ткани, то опухоль имеет стремительное развитие. В данном случае приостановить ее можно только химиопрепаратами. При превышении показателя Ki-67 в 85-95% летальный исход вероятен практически в каждом случае.

Статус рака – HER2

Именно рецепторы HER2, лежащие на поверхности клеток, являются некими “антеннами” для улавливания химических сигналов или команд, отдаваемых организмом клеткам. Рецепторы должны быть в норме, а клетки молочной железы – своевременно делиться и восстанавливаться.

У многих женщин так называемый ген HER2 начинает давать сбой, вырабатывая множество рецепторов. Клетка, получая опасный сигнал, начинает быстрее делиться и размножается уже бесконтрольно. Когда врачи утверждают, что иммуногистохимическое исследование указывает на статус HER2, это значит следующее: диагностирован рак молочной железы, его начальная стадия.

У каждой женщины при подозрении на рак определяется статус опухоли. Для чего это нужно? Конечно же, для назначения правильной терапии. Статус постепенно может трансформироваться из положительного в отрицательный. Иммуногистохимия выявляет степень онкогенных клеток в забранной патологической ткани. При раке же и карциноме молочной железы рецептор или белок превышает свое процентное содержание. Клетки становятся неуправляемыми и начинают неконтролируемо делиться, расти.

Расшифровка анализа

Исследуется структура взятой ткани, количество атипичных антител, по которым и будет определен вид рака.

Интерпретация или расшифровка анализа проводится онкологом, который и должен донести до пациента всю полученную информацию. В результате (на бланке анализа) обязательно прописываются показатели Ki 67, указывающие на степень озлокачествления опухоли. Кроме того, обследуется гормональный фон женщины, от которого напрямую зависит поведение новообразования, степень его прогрессирования и скорость появления метастазов.

Иммуногистохимическое обследование диагностирует стадию, форму и степень развития онкологии, после чего и будет подобрано самое оптимальное лечение. Если гормональный фон в норме, но опухоль неактивна, лечение может ограничиться назначением пациенткам гормональных препаратов. При излишней активности опухоли, то есть при повышении показателей Ki 67, уже не обойтись без назначения более тяжелых химических средств.

Клетки в здоровом организме должны самостоятельно восстанавливаться и нормально делиться. Значит, при позитивном HER2 рак будет прогрессировать, а опухоль станет быстро увеличиваться в размерах. Для подавления стимуляции роста новообразования при положительном HER2 лечение назначается медикаментозное (Герцептин, Лапатаниб). Если HER2 отрицательный или негативный, то лечение иное – с назначением более действенных химиопрепаратов.

ИГХ считается сложным и многоступенчатым методом. Используется много маркеров, и расшифровать результаты иммуногистологических анализов правильно под силу лишь специалистам. Обычно при выявлении онкологии у женщин собирается целый консилиум врачей, чтобы более адекватно распланировать и выбрать всю последующую тактику лечения.

ИГХ важен для врачей с целью выбора правильной тактики при назначении лечения, для дачи прогнозов на будущее

Применение в гинекологии

Нередко врачи назначают пациенткам ИГХ-исследование при дисплазии шейки матки. Эта патология сопровождается перерождением здоровых клеток в атипические. Такое состояние врачи оценивают как предраковое. Дисплазия 3 степени практически всегда приводит к образованию злокачественной опухоли на шейке матки.

ИГХ помогает оценить риск развития онкологических заболеваний у пациенток с дисплазией. Для исследования используют антитела к белкам p16INK4a и Ki-67.

При анализе определяют не только концентрацию антигенов, но и соотношение между уровнями вышеуказанных белков. Референсные значения показателей исследования индивидуальны и зависят от предполагаемого диагноза. Точно расшифровать результаты теста может только лечащий врач. Высокие показатели концентрации антигенов и соотношения между p16INK4a и Ki-67 указывают на большой риск развития рака шейки матки.

Что это такое

Метод иммуногистохимии используют как дополнительный. Он помогает выявить в биологическом материале специфичные белки, которые характерны для определенного вида клеток и, как следствие, отличить одну разновидность опухолевого образования от другой. Также исследование помогает выявить:

1. Маркеры иммуногистохимии, которые отвечают за чувствительность опухоли к воздействию лекарственных средств, лучевой терапии.
2. Метастатический характер происхождения образования и определить первичный источник поражения.
3. Гормоны и рецепторы к ним.
4. Малигнизацию клеток.

ИГХ как метод диагностики широко применяется в онкологии. Этот вид изучения тканей предполагает применение определенных реактивов. Они содержат в себе антитела или белковые соединения, которые помечены определенными веществами.

ВАЖНО! Антитела (иммуноглобулины, специфические белки) вырабатываются различными клетками организма и обеспечивают иммунитет, при внедрении антигена. Часто вырабатываются при попадании вирусов, бактерий, при онкологии, вакцинации, пересадке тканей, а иногда и против собственных клеток, что приводит к аутоиммунным патологиям

Получают их от различных животных. [>

При контакте с антигенами, которые могут содержаться в исследуемом биоптате, происходит специфическая реакция (антигенами являются межклеточные вещества ткани, компоненты клеточных структур). В результате нее можно судить о наличии или отсутствии того или иного вещества в тканях.

ВАЖНО! Антигены — генетически чужеродное тело, которое при попадании в организм вызывает иммунную реакцию, а именно выработку антител для подавления этого чужеродного агента. В случае с ИГХ-анализом антигенами выступают молекулы, которые вырабатываются патологически измененными опухолевыми клетками

Структурная специфичность исследования — принципиально отличает ИГХ от других способов иммунологической диагностики, которые используют реакцию антиген-антитело. Т. е. специалисты оценивают помимо присутствия тех или иных веществ в тканях (при наличии или отсутствии окрашивания) и их количественный состав (по интенсивности окрашивания), еще пространственное распределение различных структурных элементов (цитоплазма, ядро, мембрана клетки и пр.) в тонком окрашенном срезе.

Гены, рецепторы и факторы роста

Точные причины, которые заставляют клетки активно делиться, образуя новообразования, зачастую имеющие онкологическую направленность, науке до сих пор неизвестны. Но вот то, как происходит рост клеток, уже достаточно хорошо изучено. Клетки тканей имеют сложную структуру. На поверхности клетки есть так называемые HER-2-рецепторы. Они служат своеобразными антеннами, слушающими команды организма. Кстати, аббревиатура HER-2 берет начало от английского словосочетания human epidermal growth factor receptor 2, что в дословном переводе значит «рецептор человеческого эпидермального фактора роста». Эти-то рецепторы и заставляют клетку делиться, расти или самовосстанавливаться.

Для чего используют иммуногистохимию при раке молочной железы

В области исследования грудной железы данное исследование используется в качестве предварительной диагностики для установления точного диагноза, в том числе при злокачественных образованиях. Данное исследование дает возможность определить следующее:

• Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
• Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
• Первоначальный очаг заболевания.
• Стадию заболевания (например, степень рака).
• Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
• Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Исследование способно детально изучить заболевание, что дает возможность полностью диагностировать заболевание и подобрать правильное лечение. Это играет не маловажную роль в диагностике, лечении, продолжительности жизни онкологических больных. Также можно сказать, что с помощью данного метода можно:

• на более раннем сроке диагностировать заболевание;

• выяснить непосредственный очаг заболевания;
• найти границы заболевания;
• определить точное место образования;
• определить точный вид новообразования;
• определить точную стадию развития;
• определить рост патологических клеток;
• узнать реакцию на препараты (в частности, на гормоны, на лучевую терапию и так далее);
• определить необходимость операции;
• помогает точно оценить качество лечения.

Применение технологии в репродуктивной медицине

Иммуногистохимия в репродуктивной медицине применяется для диагностики причин бесплодия и оценки потенциальной эффективности ЭКО. Известно, что беременность при применении вспомогательных репродуктивных технологий наступает у 35–45 % пациенток после первой попытки. Около 30 % пациенток имеют многократные неудачи, причины которых различны, в том числе неблагоприятное состояние эндометрия.

Долгое время для изучения патологии эндометрия использовался гистологический метод исследования. Однако он не позволял достоверно оценить рецептивную способность эндометрия, что породило потребность в поиске более информативных методов диагностики. Одним из них стала иммуногистохимия, которую в настоящее время используют в следующих целях:

1. Исследование структурных особенностей эндометрия.
2. Определение способности эндометрия к имплантации.
3. Определение негативных факторов наступления беременности, например, гиперэкспрессии альфа-эстрогеновых рецепторов в железистых и стромальных клетках в среднелютеиновую фазу, снижение прогестерон+ стромальных клеток.
4. Определение благоприятных факторов наступления беременности — оптимальное соотношение прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, количество эндометриальных эпителиоцитов с пиноподиями более 50 %.
5. Оценка восприимчивости эндометрия к гормонам. На основании полученной информации корректируют дозу гормональных препаратов, используемых на этапах планирования и проведения ЭКО.
6. Определение иммунокомпетентных клеток-киллеров, препятствующих наступлению беременности.

Способ проведения анализа и его расшифровка

Иммуногистохимическое исследование проводят в несколько этапов. Начинается все с подготовки, а именно с получения нужного материала для дальнейшего исследования. Это крайне неприятная процедура, которую выполняет только опытный специалист в условиях стационара. Биопсия может заключаться в вырезании кусочка ткани, а также в получении материала методом эндоскопии либо операции. Все зависит исключительно от того, где именно находится область, которую нужно исследовать.

После получения достаточного количества тканей их сразу помещают в емкость с формалином. Далее материал для дальнейшего исследования будет отправлен в лабораторию.

Специалисты проводят с тканями несколько важных манипуляций. Их необходимо обезжирить и залить парафином, чтобы получить гистологический белок. Стоит заметить, что данный тип подготовки материала очень выгоден, так как в таком состоянии он может храниться бесконечно. Если понадобится повторное проведение исследования на данных тканях, можно взять эти образцы, так как они не испортятся.

Следующим этапом будет микротомирование. Этот метод представляет собой получение тонких срезов с парафиновых блоков. Таким образом, материал для дальнейшего исследования получится шириной в 1 мкм, но не более. Подобные срезы размещаются на стекле и окрашиваются несколькими специальными препаратами. Речь идет о растворах с антителами, которые подготовлены в стандартной концентрации.

Для того чтобы провести исследования тканей на ИГХ, может быть использована малая либо большая панель. В зависимости от этого будет отличаться количество срезов и используемых для их обработки жидкостей. На малой панели размещается не более 5 ячеек, а крупные оснащены 6 и более отсеками для материала. Наиболее подходящий вариант выбирает специалист в зависимости от того, какую именно информацию необходимо получить от тканей больного.

О том, что именно означают показатели ИГХ, пациенту должен рассказать врач. При различных заболеваниях и исследуемых областях значения могут меняться

Если взять в качестве примера онкологию груди, то тут нужно обратить внимание в первую очередь на такую строчку, как Ki-67. Данный показатель говорит о злокачественности новообразования

Если у представительницы прекрасного пола был диагностирован грудной рак, но уровень Ki-67 будет меньше 15%, прогноз будет благоприятным.

Когда назначают ИГХ?

Показанием к иммуногистохимическому анализу может быть подозрение на наличие онкологии, что обусловлено различными симптомами. ИГХ-исследование могут назначить в отношении любых тканей из различных органов пациента. Если у врача появится подозрение на то, что проблема заключается в злокачественной опухоли, должна быть использована подобная диагностическая процедура.

Иммуногистохимический анализ чаще всего используется для определения первичных опухолей. Как правило, речь идет об одиночных новообразованиях. Если рак уже был подтвержден, ИГХ позволит увидеть еще и метастазы. Информация, полученная после проведения данного анализа, может быть использована для постановки дальнейшего прогноза для пациента и назначения правильного лечения.

Особенностью данного анализа является то, что он может быть назначен любому пациенту, так как противопоказаний к его использованию нет. Главная проблема заключается в сложности получения материалов, так как биопсия – далеко не самая приятная процедура. Но некоторым пациентам приходится терпеть, так как от этого зависит их дальнейшая жизнь.

Игх при раке молочной железы: исследование игх при онкологии молочной железы, типы рака молочной железы по игх

ИГХ при раке молочной железы — необходимость современной онкологии. Его результаты позволяют подобрать максимально подходящее женщине противоопухолевое лечение.

Что такое иммуногистохимия при РМЖ?

Иммуногистохимический анализ или коротко ИГХ основан на способности иммунитета синтезировать вещества, нейтрализующие инородные агенты — бактерии, вирусы, грибы и выделяемые ими токсины. Инородные агенты — это антигены, в их присутствии иммунные клетки вырабатывают определённое антитело, на каждое антитело имеется свой антиген.

Рак молочной железы умело скрывается от санкций иммунитета, тем не менее раковые клетки и их структурные элементы — антитела, иммунитет их не видит, но ИГХ выявляет эти антитела.

При ИГХ кусочек опухоли обрабатывают реагентами с антигенами, которые находят своё антитело и соединяются с ним, изменяя окраску исследуемого кусочка злокачественной ткани.

Для чего проводят иммуногистохимию при РМЖ?

Иммуногистохимия нужна не для научной работы, а для практического использования:

1. Обнаружение в клетках рецептора половых гормонов, чувствительного к эстрогену (ЭР) или прогестерону (ПР), прогнозирует чуть более плавное течение рака с меньшей вероятностью метастазирования, с преимущественной локализацией метастазов в костях, большую продолжительность жизни даже при генерализации процесса;
2. Разная концентрация ЭР и ПР позволяет выбрать для конкретной женщины оптимальное лечение, так при высоком уровне ЭР в сочетании с ПР и даже без них можно рассчитывать на хороший результат гормональной терапии, без рецепторов обязательна химиотерапия;
3. Наличие в клетке НЕR2 в высокой концентрации указывает на агрессивность рака, что требует химиотерапии и специфического нейтрализатора НЕR2;
4. Сочетание позитивного гормонального статуса с НЕR2 вызывает сомнения в результативности гормонотерапии, поэтому в программу лечения включается химиотерапия;
5. Высокая концентрация Ki-67 — свидетельство высокой степени злокачественности и, опять-таки, не позволяет избежать химиотерапии.

Показания к иммуногистохимии при РМЖ

При раке молочной железы для ИГХ только одно показания — определение степени агрессивности рака по его структурным компонентам для подбора оптимальной программы лечения.

Обычный морфологический анализ — гистология показывает степень злокачественности опухоли и её клеточный состав, часто неоднородный, но не позволяет определить белковые структуры:

• Чувствительность каждой клетки к лекарствам определяется наличием у нее рецепторов половых гормонов;
• Активность клеточного размножение и скорость роста ракового узла контролирует белок НЕR2, если его слишком много, то рак будет расти быстрее и формировать защиту клетки от лекарств вплоть до полной устойчивости;
• Способность быстро воспроизводить замену погибшим клеткам, захватывая при этом новые территории, определяет маркер пролиферации Ki-67.

Концентрацию всех этих клеточный субстанций и определяет ИГХ.

Подготовка к исследованию

ИГХ при раке молочной железы проводится вне организма больной, но с кусочком её опухоли. Сегодня всем женщинам с впервые обнаруженным новообразованием в железе на этапе диагностики специальной иглой выполняется биопсия — кор-биопсия.

Взятый небольшой столбик раковой ткани подвергается гистологическому исследованию и ИГХ, что позволяет верифицировать, то есть доказать наличие рака, и планировать первичное лечение. Удалённую во время операции на молочной железе опухоль тоже подвергают гистологическому и ИГХ исследованиям для уточнения плана лечения.

Женщине перед биопсией надо только успокоиться, никакой определенной подготовки от неё не требуется.

О чем говорят результаты?

Обнаружение в раке молочной железы рецепторов ЭР и ПР предсказывает относительно доброкачественное течение при эффективности гормональных препаратов, но в реальной жизни опухоль может не среагировать на эндокринную терапию, правда процент устойчивости невысок.

Обнаружение Ki-67 прогнозирует неспокойную жизнь и интенсивное лечение с использованием максимальных возможностей химиотерапии для изменения негативного прогноза болезни.

Рецептор НЕR2 — прогностический фактор, предлагающий сосредоточение на химиотерапии без особых надежд на антигормональное воздействие, но с другой стороны, предсказывает необходимость использование таргетного препарата, связывающего патологический белок.

Методика проведения

Исследование проходит в четыре этапа:

1. Долабораторная подготовка образца – получение нужного образца осуществляют с помощью биопсии. Выбор метода зависит от места локализации опухоли, ее формы и распространенности опухолевого процесса. Часть иссеченных тканей помещают в раствор формалина, после чего образец передают в лабораторию. Еще одним преимуществом иммуногистохимии является возможность исследования через определенное время. Нет необходимости обрабатывать образец сразу, как только произведена биопсия. Образцы хорошо хранятся и показывают результаты не хуже, чем в день их забора.
2. Подготовка образца к исследованию – биоматериал вводят в парафин, что необходимо для полной фиксации образца. Из полученных элементов тканей готовят тончайшие срезы, что возможно с помощью высокоточного оборудования. Чем тоньше срез, тем проще проследить химическую реакцию. Срезы укладывают на специальную панель, на которую в дальнейшем будет наноситься реагент.
3. Окрашивание срезов посредствам введения антигенов – готовят несколько образцов, на которые воздействуют различными антителами. Полученный результат фиксируют по степени окрашенности конкретного участка среза. Одновременно можно выявлять до 10 типов антигенов, что позволяет установить точную природу опухоли.
4. Оценка результатов – по истечению определенного времени (7-10 дней) с помощью высокоточного оборудования оценивают степень окраски образцов, делая заключение. Все полученные данные вносят в специальный бланк-расшифровку, который помогает при постановке точного диагноза. Его передают лечащему врачу, после чего подбирается соответствующее лечение.

Иммуногистохимия проходит в 4 этапа

Забор биоматериала осуществляют до начала лечения, чтобы оценить истинное положение вещей. Если использовались медикаменты, данные результатов будут несколько отличаться от истинных.

Для исследования используют часть биоматериала. Вторая часть может храниться в лаборатории. Это позволит снизить количество вмешательств в организм, особенно при выборе метода лечения. Нет необходимости сдавать биопсию повторно, чтобы установить, какой именно медикамент будет эффективен в той или иной ситуации.

Преимущество отдают тем лабораториям, в которых окрашивание образцов осуществляется автоматически. Минимизация человеческого вмешательства в процесс позволяет получать наиболее точные результаты.

Что выявляет

Главная цель проведения ИГХ – выявление причин бесплодия, но в ходе исследования нередко обнаруживают различные изменения в эндометрии. По этой причине анализ назначается в случае подозрения на хронический эндометрит, не сопровождающийся характерной симптоматикой.

При получении результатов удается выявить такие нарушения, как:

• неполная трансформация маточного слоя;
• развитие эндометрита;
• нарушение фаз развития эндометрия;
• гиперплазия.

Процедура подразумевает выскабливание полости матки. После этого полученный биоматериал тщательнейшим образом исследуется. Кроме того, удается высчитать промежуток времени, когда отмечается точное соответствие маточного слоя и эмбриона. В норме этот период наступает с 20–24-х суток цикла.

Что показывает ИГХ?

Выявляемые в ходе иммуногистохимического исследования вещества являются маркерами различных происходящих в организме пациента процессов.

Расшифровка и интерпретация ключевых параметров, исследуемых с помощью гистохимии, поможет более подробно разобраться в вопросе.

HER2

Анализ на HER2 – стандартная процедура при подозрении онкологии молочной железы.

Он позволяет выявить вещества, свидетельствующие о наличии популяции пролиферирующих (бесконтрольно делящихся), что и характеризует опухолевые заболевания.

Объектом ИГХ исследования на HER2 является микроскопический образец ткани молочной железы. Интерпретация результатов анализа представлена в таблице:

Индекс	Наименование	Интерпретация
HER2-отрицательный	Опухоль малоагрессивна
1+ или (+)	HER2-отрицательный	Рекомендуется проведение анализа FISH
2+ или (++)		Спорное значение – невозможно дать однозначный результат с помощью методики ИГХ. Обязательно обследование FISH!
3+ или (+++)	HER2-положительный	Выраженная агрессивность опухоли – раковое заболевание

Расшифровка аббревиатуры HER2 – human epidermal growth factor receptor 2 – рецептор фактора эпидеомального роста у человека. В норме он отвечает за деление и рост клеток.

FISH

Анализ ФИШ при раке молочной железы или FISH-исследование – дорогостоящий, но более точный метод, способный однозначно выявить амплификацию (аномальное увеличение) фактора HER2.

При анализе FISH также используются подкрашенные маркеры, однако в данном случае они вступают в реакцию с отдельными участками хромосомы, что позволяет получать гораздо более точный результат.

При исследовании возможны только два показателя индекса:

HER2-негативный рак молочной железы — Амплификация отсутствует, соответствует показателю 0 при исследовании HER2.

HER2-позитивный рак молочной железы — Амплификация присутствует, соответствует показателю 3+ при анализе HER2.

Обследование FISH не оставляет недомолвок, результат индекса трактуется однозначно.

KI-67

KI-67 при раке молочной железы (КИ 67) является маркером пролиферации (пролиферативная активность – показатель интенсивности деления клеток).

Анализ на KI-67 маркер проводится при выявлении злокачественной опухоли и ставит своей целью определение эффективности химиотерапевтических методов лечения.

Результат анализа обозначается в процентах (KI-67 n%) и интерпретируется следующим образом:

КИ 67 < 30% — Химиотерапия неэффективна, показана гормональная терапия

КИ 67 30-50% — Применима химиотерапия в сочетании с другими методами лечения

КИ 67 > 50% — Химиотерапия эффективна

В дополнение к анализу на индекс КИ 67 нередко назначают иммуногистохимию при раке молочной железы на белок P53.

Анализ на маркер пролиферативной активности по KI-67 позволяет применять химиотерапию только при максимальной ее эффективности.

Белок P53

В организме белок P53 играет роль регулятора клеточного цикла. Данный элемент является маркером злокачественности опухоли – то есть, способности опухолевых клеток образовывать метастазы.

ER/PR

Еще одно распространенное иммуногистохимическое исследование при раке грудной железы. ER и PR – это рецепторы к эстрогенам и прогестерону соответственно.

Наличие этих рецепторов в образце служи маркером того, что опухоль развивается под воздействием гормонов. Следовательно, необходимо лечение методами гормональной терапии.

Результат анализа ER/PR обозначается в баллах от 0 до 10. Чем выше показатель, тем выше чувствительность к гормональной терапии:

ER/PR <2 — Опухоль нечувствительна к гормональной терапии

ER/PR 2-10 — Рекомендуется гормональное лечение

Интенсивность гормонального лечения определяется показателем ER/PR.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора — микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап — окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

• происхождению, например, животные — кармин, растительные — гематоксилин, синтетические — эозин;
• химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание  лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.