Как обозначается анализ крови на реакцию вассермана

Как подготовиться к анализу крови RW на сифилис

Материал для исследования берется из локтевой вены в объеме, равном девяти-десяти миллилитрам.

При наличии следующих обстоятельств забор крови не осуществляется:

1. повышенная температура тела;
2. критические дни;
3. период восстановления после недавно перенесенной болезни инфекционного характера;
4. предстоящие роды и послеродовый период;
5. употребление алкоголя накануне процедуры;
6. возраст ребенка менее двух недель.

При отсутствии противопоказаний забор крови осуществляется в плановом режиме. Из полученного материала изготавливают сыворотку, которую затем используют для анализа. Происходит это следующим образом:

1. Извлеченную из вены пациента кровь помещают в термостат, внутри которого поддерживается температура в 37 ºС.
2. Когда кровь загустеет (данный процесс занимает от пятнадцати минут до получаса), в дело вступает центрифуга, совершающая около тысячи оборотов в минуту.
3. Примерно через пятнадцать минут непрерывной работы центрифуги над кровяным сгустком появляется прозрачная жидкость – кровяная сыворотка – которую извлекают для дальнейших исследований. Если в сыворотке обнаруживаются эритроциты, жидкость помещают обратно в центрифугу.
4. Очищенная от эритроцитов сыворотка инактивируется при температуре 55-57 ºС (данный процесс занимает в среднем полчаса).

Инактивированную сыворотку, лишенную естественного комплемента, используют по назначению либо помещают в холодильник, где она хранится несколько дней (но не более недели).

Общее описание

В крови заразившегося человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. В возбудителе заболевания — бледной трепонеме (Treponema pallidum), содержится антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью RW. Положительная реакция Вассермана как раз и свидетельствует о присутствии таких антител в крови человека и на этом основании делается вывод о наличии заболевания.

Показателем результата исследования в РСК служит реакция гемолиза. В реакции участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Её инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С. Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что если в испытуемой сыворотке отсутствуют сифилитические антитела, то реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. А если имеются специфические антитела, комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело и гемолиза не происходит.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для прочной фиксации комплемента на специфическом комплексе, смесь исследуемой сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при температуре 37° на 45-60 мин. (I фаза реакции), после чего вносят гемолитическую систему, состоящую из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки (II фаза реакции). Далее пробирки вновь помещают в термостат на 30-60 минут до наступления гемолиза в контроле, в котором антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки вносят физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускают в готовом виде с указанием титра и способа разведения.

Максимальную позитивность реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов: ++++ (резко положительная реакция) — свидетельствует о полной задержке гемолиза; +++ (положительная реакция) — соответствует значительной задержке гемолиза, ++ (слабоположительная реакция) — свидетельство частичной задержки гемолиза, + (сомнительная реакция) — соответствует о незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Если врач подозревает у пациента ложноположительный результат на реакцию Вассермана, то он может назначить ему ряд дополнительных исследований, которые обычно применяются при диагностике заболеваний, передающихся половым путем.

• Сифилис.
• Подозрение на сифилис у людей, находящихся в контакте с больными сифилисом.
• Беременность.
• Наркотическая зависимость.
• Прерывание беременности.
• Лихорадка, сопровождающаяся увеличением регионарных лимфатических узлов.
• Первичное посещение поликлиники.
• Поступление в стационар на лечение.
• Лечение в психиатрическом или неврологическом стационаре.
• Донорство крови, тканей, спермы, других секретов организма.
• Работа в сфере услуг, торговли, медицинского обслуживания, социальной и образовательной сферах.

Кровь на RW сдается только натощак. Крайний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до сдачи анализа. Медицинский работник усаживает пациента или укладывает на кушетку и осуществляет забор 8-10 мл крови из локтевой вены.

Если анализ необходимо сделать младенцу, то забор осуществляется из черепной или яремной вены.

За 1—2 суток до сдачи анализа следует прекратить употребление спиртных напитков. Также не рекомендуется есть жирную пищу — она может исказить результат. В период подготовки к анализу следует воздержаться от приема препаратов наперстянки.

Результат анализа будет ложным, если:

• у пациента повышена температура тела,
• человек болен инфекционным заболеванием или только переболел им,
• у женщины период менструации,
• беременная в последние недели перед родами,
• первые 10 дней после родов,
• первые 10 дней жизни младенца.

Реакция Вассермана

Тест для диагностики сифилиса был назван по имени немецкого иммунолога, создавшего его в 1906 году. Исследование позволяет выявить начальные стадии болезни — первичный и вторичный сифилис, и еще недавно было обязательно для всех категорий населения.

Классический тест не отличается высокой достоверностью, и с 2006 года в России отменен.

Вместо RW-анализа крови получила распространение группа реакций связывания комплемента, в том числе МП-тест или микрореакция преципитации.

В ряде лабораторий продолжают использовать РВ реакцию при диагностике скрытого и вторичного сифилиса, а под названием «RW-анализнередко подразумевают метод микропреципитации.

Когда назначают анализ на РВ

Кровь на РВ исследуют:

• при прохождении профессионального осмотра для устройства на работу;
• при сдаче крови или спермы донорами;
• во время беременности.

При беременности анализ крови на RW сдают 3 раза, и объясняется такое внимание, тем, что это исследование позволяет предотвратить у плода развитие врожденного сифилиса. Бледная трепонема передается через плаценту от зараженной матери и поражает все органы плода

Внутриутробное заражение чаще всего заканчивается гибелью малыша на 7 месяце беременности

Бледная трепонема передается через плаценту от зараженной матери и поражает все органы плода. Внутриутробное заражение чаще всего заканчивается гибелью малыша на 7 месяце беременности.

Чтобы снизить все возможные риски для развития плода, анализ крови на RW беременные женщины сдают:

• при постановке на учет;
• на 30 неделе;
• перед родами.

Показанием для сдачи крови на реакцию Вассермана служат:

• наркомания;
• бытовой контакт с лицами, инфицированными бледной трепонемой;
• случайный незащищенный половой контакт;
• срочная госпитализация с признаками инфицирования трепонемой;
• заключение в тюрьме;
• увеличение лимфатических узлов неясного характера с высокой температурой.

Сегодня анализ крови на RW заменили более точные способы диагностики. Реакция Вассермана показывает большое число ложноположительных результатов, не всегда определяет присутствие возбудителя инфекции на третьей стадии сифилиса.

Суть метода

Для проведения классического исследования требуются:

• образец венозной крови больного – всего отбирается 8 – 10 мг из локтевой вены;
• кардиолипин – фосфолипид, полученный из клеточных митохондрий сердца быка.

Фосфолипид кардиолипин входит в состав внутренних мембран митохондрий различных видов животных. Есть это соединение и в клетках бледной трепонемы Treponema pallidum.

Когда трепонема попадает в кровь, фосфолипид выступает антигеном, к которому иммунитет человека вырабатывает антитела.

В образце крови зараженного человека присутствуют антитела к кардиолипину. Чтобы это выявить, для проведения RV анализа берут кардиолипин, что был заранее приготовлен из сердца быка, и помещают в пробирку с образцом крови больного.

Если в крови присутствуют антитела к фосфолипиду, то они взаимодействуют, а реакция считается положительной.

Степень взаимодействия отражает количество антител, присутствующих в образце и уровень поражения сифилисом.

При отсутствии взаимодействия антител крови с кардиолипином RW-тест считается отрицательным.

Кардиолипин не является специфическим антигеном по отношению к трепономам. Кроме взаимодействия с антителами к трепономам, данный фосфолипид способен взаимодействовать с антителами, которые вырабатываются к целому ряду инфекционных заболеваний.

Подготовка к анализу на РВ

Анализ проводят натощак в утреннее время. Для проведения классического РВ-исследования требуется образец венозной крови.

К анализу на РВ следует подготовиться, это поможет избежать ложноположительных результатов, что отмечается, если принимать пищу ранее, чем за 6 часов до сдачи крови на RW.

Нельзя за сутки перед исследованием крови употреблять жирную, жареную пищу или спиртосодержащие напитки.

Прием лекарственных препаратов, например, наперстянки, введение сывороток также способны исказить результаты исследования.

Женщинам во время менструации следует воздержаться от проведения теста, так как в этот период возможно искажение реакции. Нельзя проводить анализ при повышенной температуре, инфекционном заболевании.

Когда будет готов анализ

Узнать, присутствуют ли в крови антитела к кардиолипину, можно уже спустя 2 суток после проведения теста на реакцию Вассермана. Информацию о степени заражения и количества возбудителя болезни можно узнать спустя неделю после сдачи крови.

Доверить расшифровку теста на РВ лучше всего врачу, и не пытаться самостоятельно интерпретировать полученные данные, чтобы не пугаться напрасно в случае ложноположительного ответа из лаборатории.

Ложноположительная реакция Вассермана

Реакция Вассермана, успешно используемая для диагностики и контроля эффективности лечения сифилиса, широко применяется при массовых обследованиях доноров, беременных женщин, работников образовательных учреждений, торговли и общественного питания.

Реакция Вассермана — как сдавать анализ?

Данный анализ является одним из основных серологических исследований. Кровь для анализа рекомендуется сдавать натощак. Это связано с тем, что употребление алкогольных напитков и жирной пищи может отразиться на точности полученных результатов. Забор крови производится как из вены, так и из пальца.

Ложная реакция Вассермана

В основе реакции Вассермана лежит выработка иммунной системой антител в сыворотке крови заболевшего человека. Выявляются антитела в результате лабораторного исследования антигена – кардиолипина. Положительной реакция считается в случае обнаружения антител в исследуемом образце крови. Однако, нередки случаи так называемой ложноположительной реакции Вассермана. Это связано с парадоксальной реакцией иммунитета человека, когда иммунная система начинает бороться с клетками собственного организма. Именно при таком варианте развития событий в крови тестируются те же противолипидные антитела, что и при заболевании сифилисом.

Причины ложноположительная реакция Вассермана

По данным статистики подобные результаты встречаются в 0,1-2% случаев от общего числа исследований. Возможными причинами могут быть:

• вирусные инфекции (гепатит, кишечные инфекции, малярия, туберкулез);
• системные заболевания (красная волчанка, дерматомиозит, склеродермия и прочие);
• сердечные воспалительные заболевания;
• беременность;
• сахарный диабет;
• заболевания крови;
• прием алкоголя и наркотиков.

Ложноположительная реакция Вассермана в некоторых из перечисленных случаев через определенный продолжительный период (год и более) может становиться отрицательной даже без всякого лечения.

Постановка диагноза ложноположительная реакция Вассермана при беременности является стрессовым фактором для женщины, готовящейся к материнству. Для исключения постановки ошибочного диагноза в таких случаях рекомендовано повторное серологическое исследование, которое проводится через 2 недели после первого. Лечение может быть назначено только после повторного установления резкоположительной реакции.

Как правило, неспецифическая серологическая реакция в большинстве случаев бывает слабоположительной. Следует также учитывать, что выявление слабоположительной реакции Вассермана может зависеть и от методической чистоты и техники постановки исследования.

Что такое реакция Вассермана? Для сегодняшней молодежи фамилия Вассерман напоминает о популярной телепередаче, а много лет назад в СССР она устойчиво ассоциировалась с кожвендиспансером. Так называется анализ крови на сифилис, который и до сих пор входит в обязательные исследования.	Анализы на скрытые инфекции Опасность скрытых половых инфекций трудно переоценить. Они незаметны для женщины и даже для ее врача, пока не сделаешь специальные анализы. А в это время болезнь ведет свою разрушительную деятельность.
Если врач настаивает на проведении гистологического исследования шейки матки, не стоит этого бояться. Необходимая для здоровья женщины диагностическая манипуляция делается безболезненно и быстро во время обычного приёма гинеколога.	Анализ на цитологию шейки матки Цитологическое исследование шейки матки позволяет рассмотреть тип и строение клеток ее эпителия. Для этого делается соскоб, детально рассматриваемый под микроскопом: какие клетки, как выглядят, есть ли среди них атипичные.

Расшифровка результатов

Расшифровка результатов анализа проводится лечащим врачом. Результат может быть отрицательным, положительным, спорным. Но не всегда положительная реакция означает наличие заболевания.

RW отрицательная норма

Нормой считается полный гемолиз, то есть разрушение эритроцитов. Если это произошло, значит, реакция отрицательная. Во время расшифровки анализа крови при проведении экспресс-диагностики сифилиса (ЭДС) необходимо учитывать, что в течение первых 2 недель после инфицирования RW будет отрицательной. Исключение составляет скрытый вторичный период, когда временно результат из положительного переходит в отрицательный.

RW положительная

Положительная реакция обозначается знаком «+». Количество плюсов может быть разным — это зависит от степени вероятности заболевания. В случае первичного заражения реакция становится положительной на седьмой неделе болезни. У некоторых больных RW положительный уже на пятой неделе. Если сифилис вторичный, то обследование покажет наличие инфекции сразу.

Если у пациента скрытый вторичный период, то реакция может перейти в отрицательную, но затем во время рецидива снова будет образовываться осадок, свидетельствующий о наличии болезни. В случае врожденного характера заболевания диагностика приведет к положительному результату.

Диагностику проводят также с целью контроля проводимого лечения. Бывают случаи, когда, несмотря на проводимую терапию, реакция остается положительной. Такое явление носит название серорезистентный сифилис. В этом случае такая диагностика не дает ответа на вопрос об уничтожении инфекции, и ее перестают проводить.

RW ложно положительная

Бывают ситуации, когда у человека, не болеющего венерическим заболеванием, результат обследования оказывается положительным. Такое случается, если по каким-либо причинам иммунная система начинает уничтожать свои же клетки. Тогда при диагностике выявляются антитела, характерные болезни. Такое явление носит название ложноположительная реакция Вассермана.

Причинами получения ложного результата могут стать:

• вирусные и инфекционные заболевания, включая кишечные инфекции и туберкулез, в том числе период после выздоровления;
• аутоиммунные системные заболевания;
• воспалительные заболевания сердечно-сосудистой системы;
• сахарный диабет;
• онкологические заболевания;
• третий триместр беременности;
• заболевания кровеносной системы;
• прием некоторых лекарств;
• алкоголизм и наркомания;
• прием жирной пищи перед сдачей анализа;
• период менструации.

https://youtube.com/watch?v=Vb3MUM4x9r4

Таким образом, при получении результата, свидетельствующего о наличии сифилиса, нужно исключить возможность недостоверной реакции и провести дополнительные обследования.

Реакционный состав

Для обеспечения RW в кровь исследуемого человека вводится специальная смесь, которая содержит 3 основных ингредиента: антиген, комплемент и гемолитическую систему. Главную реакцию Вассермана обеспечивает антиген, представляющий собой искусственно приготовленный антиген возбудителя. Он может готовиться в 2 вариантах: обработанная ультразвуком культура бледной трепонемы или кардиолипин, получаемый из бычьего сердца. Чаще всего используется второй вариант, когда препарат приготавливается путем тщательной очистки спиртового липидного экстракта, получаемого из мышечных тканей бычьего сердца. Для повышения активности антигена добавляют фосфолипид, лецитин и холестерин. Необходимая доза антигена обеспечивается разведением его в растворе хлорида натрия.

Гемолитическая система соединяет в себе гемолитическую сыворотку (гемолизин) и эритроциты из крови барана. Сыворотку получают из крови кроликов и ослов, а затем ее иммунизируют эритроцитами барана. Эритроциты выделяются из крови барана в возрасте 1-4 года, а забирается она из яремной вены. Комплемент приготавливается из кровяной сыворотки, получаемой из сердца морских свинок. Для проведения RW указанные ингредиенты берутся в равном количестве — по 0,25 или 0,5 мл.

Как проводится исследование крови по Вассерману

По сути, реакция Вассермана объясняется наличием в белой трепонеме кардиолипина. Это антиген, который стимулирует синтез антител, которые выявляются в крови при помощи RW.

То есть, к сыворотке крови пациента присоединяют искусственный аналог трепонемы (кардиолипиновый антиген) и специальный связывающий белок (комплимент). Если в крови присутствуют антитела (специфические белки защитники) к бледной трепонеме, то происходит связывание кардиолипинового антигена и этих антител при участии комплемента. Полученное соединение выпадает в осадок, оцениваемый как ++++.

В норме, в сыворотке здоровых людей происходит гемолиз эритроцитов. То есть, в крови нет антител, с которыми могут реагировать кардиолипиновый антиген, а, следовательно, в сыворотке не происходит реакции адсорбирования и связывания комплемента. Свободный комплемент участвует в гемолизе, появление которого оценивается как отрицательная реакция Вассермана, то есть “-“.

Анализ крови на реакцию Вассермана имеет пять вариантов ответа:

• – (свидетельствует о том, что в сыворотке произошел полный гемолиз эритроцитов, а значит, анализ на сифилис отрицателен);
• + (такой ответ трактуется как сомнительный, одним + оценивают слабовыраженную задержку гемолиза);
• ++ (наблюдается при частичной задержке гемолиза и расценивается как слабоположительная реакция Вассермана);
• +++ (такой результат расценивается как положительная RW, свидетельствующая о значительной задержке гемолиза);
• ++++ (резко положительная RW, полное отсутствие гемолиза и выпадение осадка говорит о наличии у пациента сифилиса или других заболеваний, ставших причиной получения ложноположительной RW).

Первый ответ свидетельствует об отрицательной RW и не требует дальнейших исследований. При получении других результатов, следует учитывать, что реакция Вассермана не является высокоточной и специфичной.

Внимание. При проведении анализа крови на реакцию Вассермана достаточно часто наблюдаются ложноположительные результаты.. В связи с этим, при получении сомнительных, слабоположительных и резко положительных реакций Вассермана, для уточнения диагноза проводят трепонемные тесты

В связи с этим, при получении сомнительных, слабоположительных и резко положительных реакций Вассермана, для уточнения диагноза проводят трепонемные тесты.

Ложноположительные результаты могут быть связаны с употреблением жирной пищи, спиртных напитков, беременностью, менструацией, малярией, системной красной волчанкой и т.д.

Недостатки реакции

Учитывая вышесказанное, очевидно, что сама реакция Вассермана не может обеспечить полноценную диагностику, поскольку имеет некоторые недостатки, иногда существенно влияющие на исход, к примеру:

• Не особо чувствительна, дает отрицательный результат, как на начальной стадии болезни, так и в периоде, когда поражен практически весь организм (кожные покровы, слизистые, костная система, внутренние органы) и Treponema pallidum добирается до центральной нервной системы (нейросифилис). Не «чувствует» RW и поздний врожденный сифилис, а, тем более, если человек в процессе жизни лечился антибактериальными препаратами (а он наверняка лечился, ведь детям часто их назначают);
• Не проявляет должной специфичности, поэтому положительный результат отмечается у людей, никогда не встречавших на своем жизненном пути бледную спирохету.

Ложноположительный тест обычно не сопровождается высокими показателями титров, реакция едва просматривается (2+, реже 3+), однако неспецифические реакции могут дополнительно создать проблемы и треволнения людям, имеющим другие заболевания:

1. Лепру (проказу);
2. Малярию;
3. Аутоиммунную патологию;
4. Злокачественные новообразования (опухоли в стадии распада);
5. Инфаркт миокарда.

Почти естественным считается появление плюсов у женщин, готовящихся к родам, а также только родивших ребенка. Ложноположительный результат не редкость у наркозависимых, алкоголиков, пациентов, получивших общую анестезию.

Для того, чтобы как-то нивелировать недостатки классического варианта реакции Вассермана, ее ставили совместно с пробой Колмера (на холоде), одновременно применяя другие серологические методы диагностики. Например, в годы популярности RW в обязательном порядке вместе с ней использовались осадочные реакции Кана и Закс-Витебского, суть которых, в общем-то, максимально сходна с RW. А отличаются они лишь тем, что их производство снабжается антигенами более высоких концентраций, дающими с реагинами достаточно отчетливый осадок, позволяющий без сомнения дать оценку в четыре три или два плюса.

Причины проведения анализа крови на Rw

Реакция проводится в двух случаях.

• Для обследования и диагностики. Чтобы избежать распространения инфекции, определить зараженных людей, а также в профилактических целях настоятельно рекомендуется сдать кровь:
• Людям, которые связаны с выращиванием, реализацией и переработкой продуктов питания (продавцы, повара в общепитах, школах, детских садиках, работники заводов, ферм, прочие),
• Медработникам (весь персонал медицинских учреждений),
• Людям, которые контактируют с зараженными данной инфекцией,
• Зависимым людям, наркоманам и ВИЧ-инфицированным,
• Донорам (крови, спермы, прочего),
• Людям, которые впервые обратились за медицинской помощью или поступили в стационар,
• Пациентам накануне операции,
• Людям с длительными неопознанными симптомами, сопровождающимися лихорадкой,
• Людям, которые собираются ехать в санаторно-курортные базы и здравницы,
• Беременным несколько раз,
• При болях в костях,
• После случайного незащищенного полового акта,
• Каждым с признаками сифилиса (увеличенные лимфоузлы, язвы на половых органах, сыпь на коже, прочее),
• Всем, кто проходит ежегодный плановый медосмотр.
• В процессе лечения. Назначается для определения динамики протекания заболевания и форм сифилиса (вторичной, третичной), которые часто проявляют себя, как заболевания внутренних органов. Также выясняется эффективность лечения, насколько хорошо действуют лекарства, при необходимости – делается корректировка лечения.

Специфичность теста

Реакция Вассермана отличается низкой специфичностью, так как антиген кардиолипин присутствует не только в митохондриях возбудителя сифилиса. Фосфолипид обнаруживается в митохондриях многих вирусов, протозоа, бактерий.

Ложноположительные результаты реакции Вассермана отмечаются также у 3% совершенно здоровых людей. В то же время, 3 недели после заражения бледной трепонемой РВ анализ показывает отрицательные результаты.

Это объясняется тем, что инкубационный период сифилиса составляет 5 – 7 недель и вероятность точного результата в этот период не 100%.

В первые 3 недели после инфицирования у большинства зараженных результат РВ анализа отрицательный. Между 5-6 неделями у 25% людей, заразившихся сифилисом, реакция Вассермана положительна.

Начиная с 7 недели развития первичного сифилиса, реакции Вассермана у 100% заразившихся положительна.

Положительна РВ-реакция и при вторичном сифилисе. На стадии третичного сифилиса из-за недостаточности иммунитета реакция Вассермана может дать ложноотрицательный результат.

Ложноположительные результаты

Антитела к кардиолипину могут появиться у человека после перенесенной пневмонии, заболеваний крови, печени. Ложноположительные результаты возможны при беременности, менструации и 10 дней после родов.

По медицинской статистике, ложноположительные результаты при беременности отмечаются в 1,5% случаев. В случае положительного ответа обязательно назначают проведение других тестов.

Такое дополнительное исследование крови на РВ, позволяет выяснить, был ли анализ ложноположительным или это случайная ошибка, не означающая, что в организме присутствуют бледные трепонемы.

Ошибочно положительный результат отмечается в случае:

• туберкулеза;
• малярии;
• лептоспироза;
• тифа;
• скарлатины;
• проказы;
• системной красной волчанки.

Ложноположительная реакция может отмечаться у больных, страдающих:

• инфарктом миокарда;
• аутоиммунными нарушениями;
• пищевым отравлением;
• алкоголизмом.

Ложные результаты иногда объясняются травмой или пожилым возрастом человека.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А.  Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.